Ενότητα Εργασίας 1. Αναπαραγωγή και Παραγωγή Αυγών
Στόχοι
1. Περιγραφή του ενδοκρινικού ελέγχου του αναπαραγωγικού κύκλου του κρανιού,
2. Ορμονική πρόκληση ωοτοκίας και εκτίμηση ποιότητας γαμετών και παραγωγή γονιμοποιημένων αυγών.
Εργασία 1.1. Περιγραφή αναπαραγωγικού κύκλου
Ομάδες από γεννήτορες κρανιού, Argyrosomus regius, (n=12, μέσο βάρος 3.5 Kg) θα διατηρηθούν σε δεξαμενές στο ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ κάτω από ελεγχόμενες περιβαλλοντικές συνθήκες και θα παρακολουθείται η αναπαραγωγική τους λειτουργία κατά την διάρκεια του έτους. Αυτό περιλαμβάνει την λήψη βιοψιών από τις γονάδες για ιστολογική εξέταση της ωογένεσης και σπερματογένεσης και αίματος για την μέτρηση των επιπέδων διαφορετικών αναπαραγωγικών ορμονών. Οι βιοψίες θα συντηρούνται σε διάλυμα φορμαλδεΰδης και γλουταραλδεΰδης (4F:1G) και μετά από έγκλειση σε ρητίνη θα κοπούν σε τομές για ιστολογική εξέταση των διαφόρων φάσεων της ωογένεσης και σπερματογένεσης. Κατά την διάρκεια της αναπαραγωγικής περιόδου, θα γίνει επίσης εκτίμηση της ποιότητας σπέρματος (πυκνότητα, κινητικότητα και επιβίωση) και ωοκυττάρων (λεκιθογένεση, τελική ωρίμανση και απόπτωση). Η ΙΡΙΔΑ θα ετοιμάσει κατάλληλα εμπλουτιστικά τροφών γενννητόρων με σκοπό την βελτίωση της αναπαραγωγικής λειτουργίας και την αύξηση της ποιότητας των αυγών. Τα εμπλουτιστικά αυτά θα βασίζονται στην χρήση βιταμινών, λιπαρών οξέων και καροτενοειδών.
Εργασία 1.2 Πρόκληση ωοτοκίας και αξιολόγηση ποιότητας αυγών
Κατά την διάρκεια της αναπαραγωγικής περιόδου, θα χρησιμοποιηθούν ορμονικές θεραπείες για την πρόκληση της ωοτοκίας και έλεγχο της αναπαραγωγικής λειτουργίας. Μετά από ιστολογικό έλεγχο των γονάδων των θηλυκών (βιοψία) και αρσενικών (απελευθέρωση σπέρματος) γεννητόρων, θα επιλεγούν τα άτομα με τις πιο ώριμες γονάδες. Στα ψάρια αυτά θα δοθούν εμφυτεύματα GnRHa τα οποία αναμένεται να προκαλέσουν τελική ωρίμανση των ωοκυττάρων και άυξση της σπερμίασης, όπως επίσης και πρόκληση της γαμετοτοκίας και παραγωγής γονιμοποιημένων αυγών. Τα αβγά θα συλλεχθούν από την έξοδο της δεξαμενής και θα πραγματοποιηθεί εκτίμηση της ποιότητας των παραγομένων αυγών (γονιμότητα, ποσοστά γονιμοποίησης, εκκόλαψης και επιβίωσης νυμφών) με τη μέθοδο πλακών μικροτιτλοδότησης.
1. Περιγραφή του ενδοκρινικού ελέγχου του αναπαραγωγικού κύκλου του κρανιού,
2. Ορμονική πρόκληση ωοτοκίας και εκτίμηση ποιότητας γαμετών και παραγωγή γονιμοποιημένων αυγών.
Εργασία 1.1. Περιγραφή αναπαραγωγικού κύκλου
Ομάδες από γεννήτορες κρανιού, Argyrosomus regius, (n=12, μέσο βάρος 3.5 Kg) θα διατηρηθούν σε δεξαμενές στο ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ κάτω από ελεγχόμενες περιβαλλοντικές συνθήκες και θα παρακολουθείται η αναπαραγωγική τους λειτουργία κατά την διάρκεια του έτους. Αυτό περιλαμβάνει την λήψη βιοψιών από τις γονάδες για ιστολογική εξέταση της ωογένεσης και σπερματογένεσης και αίματος για την μέτρηση των επιπέδων διαφορετικών αναπαραγωγικών ορμονών. Οι βιοψίες θα συντηρούνται σε διάλυμα φορμαλδεΰδης και γλουταραλδεΰδης (4F:1G) και μετά από έγκλειση σε ρητίνη θα κοπούν σε τομές για ιστολογική εξέταση των διαφόρων φάσεων της ωογένεσης και σπερματογένεσης. Κατά την διάρκεια της αναπαραγωγικής περιόδου, θα γίνει επίσης εκτίμηση της ποιότητας σπέρματος (πυκνότητα, κινητικότητα και επιβίωση) και ωοκυττάρων (λεκιθογένεση, τελική ωρίμανση και απόπτωση). Η ΙΡΙΔΑ θα ετοιμάσει κατάλληλα εμπλουτιστικά τροφών γενννητόρων με σκοπό την βελτίωση της αναπαραγωγικής λειτουργίας και την αύξηση της ποιότητας των αυγών. Τα εμπλουτιστικά αυτά θα βασίζονται στην χρήση βιταμινών, λιπαρών οξέων και καροτενοειδών.
Εργασία 1.2 Πρόκληση ωοτοκίας και αξιολόγηση ποιότητας αυγών
Κατά την διάρκεια της αναπαραγωγικής περιόδου, θα χρησιμοποιηθούν ορμονικές θεραπείες για την πρόκληση της ωοτοκίας και έλεγχο της αναπαραγωγικής λειτουργίας. Μετά από ιστολογικό έλεγχο των γονάδων των θηλυκών (βιοψία) και αρσενικών (απελευθέρωση σπέρματος) γεννητόρων, θα επιλεγούν τα άτομα με τις πιο ώριμες γονάδες. Στα ψάρια αυτά θα δοθούν εμφυτεύματα GnRHa τα οποία αναμένεται να προκαλέσουν τελική ωρίμανση των ωοκυττάρων και άυξση της σπερμίασης, όπως επίσης και πρόκληση της γαμετοτοκίας και παραγωγής γονιμοποιημένων αυγών. Τα αβγά θα συλλεχθούν από την έξοδο της δεξαμενής και θα πραγματοποιηθεί εκτίμηση της ποιότητας των παραγομένων αυγών (γονιμότητα, ποσοστά γονιμοποίησης, εκκόλαψης και επιβίωσης νυμφών) με τη μέθοδο πλακών μικροτιτλοδότησης.