Ενότητα Εργασίας 5. Μελέτη διατροφικών απαιτήσεων
Στόχοι
1. Προσδιορισμός της βέλτιστης αναλογίας πρωτεΐνης/λίπους στην τροφή,
2. Προσδιορισμός της βέλτιστης θερμοκρασίας ανάπτυξης-κατασκευή εξίσωσης αύξησης με βάση τη θερμοκρασία και το βάρος του ψαριού,
3. Προσδιορισμός των διατροφικών απαιτήσεων του κρανιού σε απαραίτητα αμινοξέα (EAA) με σκοπό οι όποιες μελλοντικές υποκαταστάσεις του ιχθυάλευρου της τροφής από φυτικής προέλευσης πρώτες ύλες να λαμβάνουν υπόψη και να ικανοποιούν πρωτίστως αυτές τις ανάγκες του ψαριού,
4. Πεπτικότητα – Φυσιολογία πέψης,
5. Επίδραση εμπορικών σιτηρεσίων έως το εμπορεύσιμο μέγεθος στην ανάπτυξη, μορφομετρικές παράμετρους, αξιοποίηση σιτηρεσίου, σύσταση σώματος – ήπατος και μεταβολισμό λιπους.
Εργασία 5.1. Μελέτη διατροφικών απαιτήσεων σε Π/Ε και επιδράσεις στην ανάπτυξη - σύσταση σώματος και ήπατος
Κατά τη διάρκεια της Εργασίας αυτής το βέλτιστο επίπεδο πρωτεΐνης και λίπους θα προσδιοριστεί μέσω της επίδρασης των διαφορετικών τροφών στην ανάπτυξη και στην μετατρεψιμότητα της τροφής του κρανιού. Οι τροφές θα περιέχουν τους συνδυασμούς τριών επιπέδων πρωτεΐνης (40, 45, 53%) και τριών επιπέδων λίπους (12, 17, 20%) με τρεις επαναλήψεις ανά τροφή. Οι τροφές θα χορηγηθούν σε ψάρια βάρους 20 g. Τα ψάρια (20-50 άτομα/δεξαμενή) θα τοποθετηθούν σε δεξαμενές των 500 l υπό φυσική φωτοπερίοδο και θα ταΐζονται ως την φαινομενική μέγιστη κατανάλωση. Με το τέλος του πειραματισμού μετά από 12 εβδομάδες εκτροφής θα προσδιοριστούν ο ειδικός ρυθμός αύξησης, η κατανάλωση και μετατρεψιμότητα της τροφής. Τα πειράματα θα πραγματοποιηθούν στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ.
Εργασία 5.2 Επίδραση θερμοκρασίας στην αύξηση
Για τον προσδιορισμό της βέλτιστης θερμοκρασίας εκτροφής τα ψάρια θα τοποθετηθούν σε δεξαμενές κλειστού κυκλώματος στο οποίο είναι δυνατή η θερμορύθμηση. Πριν τον έναρξη του πειράματος θα εγκλιματιστούν στις πειραματικές θερμοκρασίες (17, 20, 23, 26οC) για περίπου δυο εβδομάδες. Με το τέλος του πειραματισμού μετά από 12 εβδομάδες εκτροφής θα προσδιοριστούν ο ειδικός ρυθμός αύξησης, η κατανάλωση και μετατρεψιμότητα της τροφής. Τα πειράματα θα πραγματοποιηθούν στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ.
Εργασία 5.3 Απαιτήσεις σε απαραίτητα αμινοξέα
Σε αυτήν την Εργασία θα πραγματοποιηθεί η κατάρτιση και παραγωγή 5-6 πειραματικών σιτηρεσίων με διαφορετικές συγκεντρώσεις απαραίτητων αμινοξέων. Σαν μάρτυρας θα χρησιμοποιηθεί σιτηρέσιο στο οποίο η πρωτεΐνη και συνεπώς τα αμινοξέα θα προέρχονται κατ'εξοχήν από το ιχθυάλευρο. Θα καταρτιστούν τρία η τέσσερα σιτηρέσια ημι-καθαρά (semi-purified diets) ισο-πρωτεϊνικά και ισο-λιπιδικά στα οποία το 40-50% της πρωτεΐνης του ιχθυαλεύρου της τροφής-μάρτυρα θα αντικατασταθεί με κρυσταλλικά αμινοξέα. Αυτές οι υποκαταστάσεις θα προσομοιάζουν τη σύσταση των απαραίτητων αμινοξέων του μάρτυρα (ιχθυάλευρο), του σώματος των ψαριών καθώς και μια αύξηση ή/και ελάττωση κατά 5-10% των συγκεντρώσεων τους από εκείνη του μάρτυρα. Ιδιαίτερη προσοχή θα δοθεί στην αναλογία ΕΑΑ/ΝΕΑΑ (απαραίτητα/μη απαραίτητα αμινοξέα) σύμφωνα με τα αποτελέσματα από τη διεθνή βιβλιογραφία για άλλα είδη ψαριών.
Η χημική ανάλυση των σιτηρεσίων θα περιλαμβάνει προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης, λίπους, υγρασίας, υδατανθράκων, τέφρας και ινωδών ουσιών σύμφωνα με το AOAC (Association of Official Analytical Chemists, 1998). Επίσης, θα πραγματοποιηθούν αναλύσεις της σύστασης των τροφών και σώματος ψαριών σε αμινοξέα (Kotzamanis et al., 2008) με τη χρήση υγρού χρωματογράφου υπερ-υψηλής απόδοσης (UPLC, Waters). Το διατροφικό πείραμα θα ξεκινήσει στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ στον Αγ. Κοσμά την περίοδο των υψηλών θερμοκρασιών με κρανιούς μέσου βάρους 20-50 g και θα διαρκέσει περίπου 3 μήνες.
Στο τέλους του διατροφικού πειραματισμού θα προσδιοριστούν διάφοροι ζωοτεχνικές παράμετροι ενδεικτικοί της φυσιολογικής κατάστασης των ψαριών, όπως η ανάπτυξη, επιβίωση, εκμετάλλευση τροφής, ο ειδικός ρυθμός ανάπτυξης, ο θερμικός συντελεστής ανάπτυξης (TGC), ο συντελεστής εκμετάλλευσης της πρωτεΐνης, ο συντελεστής αξιοποίησης της πρωτεΐνης, ο συντελεστής σωματικής κατάστασης και o ηπατοσωματικός δείκτης. Επίσης θα μετρηθεί η ενζυματική ενεργότητα επιλεγμένων ένζυμων του ήπατος που εμπλέκονται στον καταβολισμό των αμινοξέων όπως η ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (ASAT) και η αμινοτρασφεράση της αλανίνης (ALAT).
Εργασία 5.4 Πεπτικότητα – φυσιολογία πέψης
Σε αυτή την Εργασία θα προσδιοριστούν οι ειδικοί δείκτες πεπτικότητας. Άτομα κρανιού βάρους (150-200 g) θα εκτραφούν με διαφορετικά ως προς Πρωτεΐνη/Ενέργεια σιτηρέσια (4-6) και θα μετρηθούν οι ειδικοί δείκτες πεπτικότητας πρωτεΐνης λίπους και υδατανθράκων. Το κάθε σιτηρέσιο θα δοκιμαστεί σε τρεις πληθυσμούς αντίγραφα. Ο τρόπος συλλογής των περιττωμάτων θα πραγματοποιηθεί με τη χρήση ειδικών παγίδων με τις οποίες είναι εφοδιασμένες ειδικές δεξαμενές γι'αυτό το σκοπό. Θα αναλυθούν δείγματα τροφών καθώς και δείγματα περιττωμάτων ως προς την ολική τους σύσταση και τα λιπαρά οξέα, και στη συνέχεια ο προσδιορισμός του άπεπτου δείκτη στα σιτηρέσια και στα περιττώματα θα οδηγήσει στον υπολογισμό της πεπτικότητας.
Η επίδραση των διαφορετικών σιτηρεσίων στη φυσιολογία της πέψης θα διερευνηθεί με την μέτρηση της ταχύτητας μετακίνησης του σιτηρεσίου στον πεπτικό σωλήνα, της περιεκτικότητας σε νερό ενώ η απορρόφηση των θρεπτικών θα πραγματοποιηθεί με μέτρηση της πεπτικότητας των αμινοξέων και λιπαρών οξέων. Τα ψάρια συντηρούνται μετά το πέρας της δοκιμής πεπτικότητας (διατροφή όχι έως κορεσμού) με τις ίδιες πειραματικές τροφές για λίγες μέρες, και πριν την εφαρμογή των δοκιμών. Κατά συνέπεια οι πληθυσμοί είναι πάντοτε σαφώς προσαρμοσμένοι στις πειραματικές τροφές.
Μετά από 1-2 ημέρες νηστεία, ώστε να έχει αδειάσει ο πεπτικός σωλήνας, δίνεται ένα γεύμα καθορισμένης ποσότητας και ακολουθεί η δειγματοληψία σε συγκεκριμένους χρόνους μετά το γεύμα για διάστημα 24-48 ωρών. Καθορισμένος αριθμός ψαριών από κάθε δεξαμενή (3-5 ψάρια/ δεξαμενή, 9-15/σιτηρέσιο) ανοίγονται κοιλιακά και διαχωρίζεται ο πεπτικός σωλήνας, ο οποίος κλείνεται στον οισοφάγο και τον πυλωρό και συλλέγεται για τις προβλεπόμενες μετρήσεις.
Το στομαχικό περιεχόμενο συλλέγεται και ζυγίζεται αποτελώντας το ολικό στομαχικό περιεχόμενο, το οποίο στη συνέχεια λυοφιλιώνεται για τον προσδιορισμό του % περιεχομένου της υγρασίας (moisture content) και το νέο βάρος αποτελεί το ξηρό στομαχικό περιεχόμενο. Εφαρμόζεται ανάλυση παλινδρόμησης των γεωμετρικών μέσων των ξηρών στομαχικών περιεχομένων στους χρόνους της δειγματοληψίας με σκοπό να εξεταστεί η εφαρμογή ενός μοντέλου για τον προσδιορισμό του ρυθμού γαστρικής εκκένωσης (ΡΓΕ, GER) όσο και του χρόνου γαστρικής εκκένωσης (ΧΓΕ, GET) του χρόνου δηλαδή που απαιτείται ώστε να αδειάσει το μισό στομαχικό περιεχόμενο. Τα στοιχεία αυτά θα δώσουν χρήσιμες πληροφορίες ώστε αποτελέσματα της δοκιμής πεπτικότητας να εξηγηθούν περαιτέρω αλλά και πρώτες πληροφορίες για την κατανάλωση των πειραματικών σιτηρεσίων.
Εργασία 5.5 Εμπορικά σιτηρέσια & μεταβολισμός λίπους
Με βάση τα αποτελέσματα της πεπτικότητας της ενότητας 5.4 θα δοκιμαστούν 2-4 σιτηρέσια τα οποία θα παρασκευαστούν από την συμμετέχοντα βιομηχανία παρασκευής τροφών ΙΡΙΔΑ σε ψάρια 200 g που θα φτάσουν το εμπορεύσιμο μέγεθος σε κλωβούς (800 g - 1 kg) στις εγκαταστάσεις της ΦΟΡΚΥΣ και ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ. Το κάθε σιτηρέσιο θα δοκιμαστεί σε τρεις πληθυσμούς αντίγραφα. Στοιχεία από την ΕΕ3 θα χρησιμοποιηθούν για την ιχθυοφόρτιση. Κατά την διάρκεια της πειραματικής περιόδου θα αξιολογηθούν οι εξής παράμετροι:
· Aναπτυξιακές και σωματομετρικές παράμετροι, ειδικός ρυθμός αύξησης, αξιοποίηση της τροφής, της πρωτεΐνης και της ενέργειας.
· Ολική σύσταση σώματος – ήπατος, και προφίλ λιπαρών οξέων σε φιλέτο.
Η μελέτη μεταβολισμού του λίπους θα πραγματοποιηθεί με την εκτίμηση της ενεργότητας βασικών ενζύμων της λιπογέννεσης και προσδιορισμό της β-οξείδωσης σε ιστό ήπατος και μυός, αλλά και προσδιορισμό ολικών λιπιδίων σε ορό όπως τριγλυκερίδια, NEFA, φωσφολιπίδια, χοληστερόλη σε επιλεγμένα χρονικά διαστήματα μετά τη χορήγηση του σιτηρεσίου στα ψάρια.
1. Προσδιορισμός της βέλτιστης αναλογίας πρωτεΐνης/λίπους στην τροφή,
2. Προσδιορισμός της βέλτιστης θερμοκρασίας ανάπτυξης-κατασκευή εξίσωσης αύξησης με βάση τη θερμοκρασία και το βάρος του ψαριού,
3. Προσδιορισμός των διατροφικών απαιτήσεων του κρανιού σε απαραίτητα αμινοξέα (EAA) με σκοπό οι όποιες μελλοντικές υποκαταστάσεις του ιχθυάλευρου της τροφής από φυτικής προέλευσης πρώτες ύλες να λαμβάνουν υπόψη και να ικανοποιούν πρωτίστως αυτές τις ανάγκες του ψαριού,
4. Πεπτικότητα – Φυσιολογία πέψης,
5. Επίδραση εμπορικών σιτηρεσίων έως το εμπορεύσιμο μέγεθος στην ανάπτυξη, μορφομετρικές παράμετρους, αξιοποίηση σιτηρεσίου, σύσταση σώματος – ήπατος και μεταβολισμό λιπους.
Εργασία 5.1. Μελέτη διατροφικών απαιτήσεων σε Π/Ε και επιδράσεις στην ανάπτυξη - σύσταση σώματος και ήπατος
Κατά τη διάρκεια της Εργασίας αυτής το βέλτιστο επίπεδο πρωτεΐνης και λίπους θα προσδιοριστεί μέσω της επίδρασης των διαφορετικών τροφών στην ανάπτυξη και στην μετατρεψιμότητα της τροφής του κρανιού. Οι τροφές θα περιέχουν τους συνδυασμούς τριών επιπέδων πρωτεΐνης (40, 45, 53%) και τριών επιπέδων λίπους (12, 17, 20%) με τρεις επαναλήψεις ανά τροφή. Οι τροφές θα χορηγηθούν σε ψάρια βάρους 20 g. Τα ψάρια (20-50 άτομα/δεξαμενή) θα τοποθετηθούν σε δεξαμενές των 500 l υπό φυσική φωτοπερίοδο και θα ταΐζονται ως την φαινομενική μέγιστη κατανάλωση. Με το τέλος του πειραματισμού μετά από 12 εβδομάδες εκτροφής θα προσδιοριστούν ο ειδικός ρυθμός αύξησης, η κατανάλωση και μετατρεψιμότητα της τροφής. Τα πειράματα θα πραγματοποιηθούν στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ.
Εργασία 5.2 Επίδραση θερμοκρασίας στην αύξηση
Για τον προσδιορισμό της βέλτιστης θερμοκρασίας εκτροφής τα ψάρια θα τοποθετηθούν σε δεξαμενές κλειστού κυκλώματος στο οποίο είναι δυνατή η θερμορύθμηση. Πριν τον έναρξη του πειράματος θα εγκλιματιστούν στις πειραματικές θερμοκρασίες (17, 20, 23, 26οC) για περίπου δυο εβδομάδες. Με το τέλος του πειραματισμού μετά από 12 εβδομάδες εκτροφής θα προσδιοριστούν ο ειδικός ρυθμός αύξησης, η κατανάλωση και μετατρεψιμότητα της τροφής. Τα πειράματα θα πραγματοποιηθούν στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ.
Εργασία 5.3 Απαιτήσεις σε απαραίτητα αμινοξέα
Σε αυτήν την Εργασία θα πραγματοποιηθεί η κατάρτιση και παραγωγή 5-6 πειραματικών σιτηρεσίων με διαφορετικές συγκεντρώσεις απαραίτητων αμινοξέων. Σαν μάρτυρας θα χρησιμοποιηθεί σιτηρέσιο στο οποίο η πρωτεΐνη και συνεπώς τα αμινοξέα θα προέρχονται κατ'εξοχήν από το ιχθυάλευρο. Θα καταρτιστούν τρία η τέσσερα σιτηρέσια ημι-καθαρά (semi-purified diets) ισο-πρωτεϊνικά και ισο-λιπιδικά στα οποία το 40-50% της πρωτεΐνης του ιχθυαλεύρου της τροφής-μάρτυρα θα αντικατασταθεί με κρυσταλλικά αμινοξέα. Αυτές οι υποκαταστάσεις θα προσομοιάζουν τη σύσταση των απαραίτητων αμινοξέων του μάρτυρα (ιχθυάλευρο), του σώματος των ψαριών καθώς και μια αύξηση ή/και ελάττωση κατά 5-10% των συγκεντρώσεων τους από εκείνη του μάρτυρα. Ιδιαίτερη προσοχή θα δοθεί στην αναλογία ΕΑΑ/ΝΕΑΑ (απαραίτητα/μη απαραίτητα αμινοξέα) σύμφωνα με τα αποτελέσματα από τη διεθνή βιβλιογραφία για άλλα είδη ψαριών.
Η χημική ανάλυση των σιτηρεσίων θα περιλαμβάνει προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης, λίπους, υγρασίας, υδατανθράκων, τέφρας και ινωδών ουσιών σύμφωνα με το AOAC (Association of Official Analytical Chemists, 1998). Επίσης, θα πραγματοποιηθούν αναλύσεις της σύστασης των τροφών και σώματος ψαριών σε αμινοξέα (Kotzamanis et al., 2008) με τη χρήση υγρού χρωματογράφου υπερ-υψηλής απόδοσης (UPLC, Waters). Το διατροφικό πείραμα θα ξεκινήσει στις πειραματικές εγκαταστάσεις του ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ στον Αγ. Κοσμά την περίοδο των υψηλών θερμοκρασιών με κρανιούς μέσου βάρους 20-50 g και θα διαρκέσει περίπου 3 μήνες.
Στο τέλους του διατροφικού πειραματισμού θα προσδιοριστούν διάφοροι ζωοτεχνικές παράμετροι ενδεικτικοί της φυσιολογικής κατάστασης των ψαριών, όπως η ανάπτυξη, επιβίωση, εκμετάλλευση τροφής, ο ειδικός ρυθμός ανάπτυξης, ο θερμικός συντελεστής ανάπτυξης (TGC), ο συντελεστής εκμετάλλευσης της πρωτεΐνης, ο συντελεστής αξιοποίησης της πρωτεΐνης, ο συντελεστής σωματικής κατάστασης και o ηπατοσωματικός δείκτης. Επίσης θα μετρηθεί η ενζυματική ενεργότητα επιλεγμένων ένζυμων του ήπατος που εμπλέκονται στον καταβολισμό των αμινοξέων όπως η ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (ASAT) και η αμινοτρασφεράση της αλανίνης (ALAT).
Εργασία 5.4 Πεπτικότητα – φυσιολογία πέψης
Σε αυτή την Εργασία θα προσδιοριστούν οι ειδικοί δείκτες πεπτικότητας. Άτομα κρανιού βάρους (150-200 g) θα εκτραφούν με διαφορετικά ως προς Πρωτεΐνη/Ενέργεια σιτηρέσια (4-6) και θα μετρηθούν οι ειδικοί δείκτες πεπτικότητας πρωτεΐνης λίπους και υδατανθράκων. Το κάθε σιτηρέσιο θα δοκιμαστεί σε τρεις πληθυσμούς αντίγραφα. Ο τρόπος συλλογής των περιττωμάτων θα πραγματοποιηθεί με τη χρήση ειδικών παγίδων με τις οποίες είναι εφοδιασμένες ειδικές δεξαμενές γι'αυτό το σκοπό. Θα αναλυθούν δείγματα τροφών καθώς και δείγματα περιττωμάτων ως προς την ολική τους σύσταση και τα λιπαρά οξέα, και στη συνέχεια ο προσδιορισμός του άπεπτου δείκτη στα σιτηρέσια και στα περιττώματα θα οδηγήσει στον υπολογισμό της πεπτικότητας.
Η επίδραση των διαφορετικών σιτηρεσίων στη φυσιολογία της πέψης θα διερευνηθεί με την μέτρηση της ταχύτητας μετακίνησης του σιτηρεσίου στον πεπτικό σωλήνα, της περιεκτικότητας σε νερό ενώ η απορρόφηση των θρεπτικών θα πραγματοποιηθεί με μέτρηση της πεπτικότητας των αμινοξέων και λιπαρών οξέων. Τα ψάρια συντηρούνται μετά το πέρας της δοκιμής πεπτικότητας (διατροφή όχι έως κορεσμού) με τις ίδιες πειραματικές τροφές για λίγες μέρες, και πριν την εφαρμογή των δοκιμών. Κατά συνέπεια οι πληθυσμοί είναι πάντοτε σαφώς προσαρμοσμένοι στις πειραματικές τροφές.
Μετά από 1-2 ημέρες νηστεία, ώστε να έχει αδειάσει ο πεπτικός σωλήνας, δίνεται ένα γεύμα καθορισμένης ποσότητας και ακολουθεί η δειγματοληψία σε συγκεκριμένους χρόνους μετά το γεύμα για διάστημα 24-48 ωρών. Καθορισμένος αριθμός ψαριών από κάθε δεξαμενή (3-5 ψάρια/ δεξαμενή, 9-15/σιτηρέσιο) ανοίγονται κοιλιακά και διαχωρίζεται ο πεπτικός σωλήνας, ο οποίος κλείνεται στον οισοφάγο και τον πυλωρό και συλλέγεται για τις προβλεπόμενες μετρήσεις.
Το στομαχικό περιεχόμενο συλλέγεται και ζυγίζεται αποτελώντας το ολικό στομαχικό περιεχόμενο, το οποίο στη συνέχεια λυοφιλιώνεται για τον προσδιορισμό του % περιεχομένου της υγρασίας (moisture content) και το νέο βάρος αποτελεί το ξηρό στομαχικό περιεχόμενο. Εφαρμόζεται ανάλυση παλινδρόμησης των γεωμετρικών μέσων των ξηρών στομαχικών περιεχομένων στους χρόνους της δειγματοληψίας με σκοπό να εξεταστεί η εφαρμογή ενός μοντέλου για τον προσδιορισμό του ρυθμού γαστρικής εκκένωσης (ΡΓΕ, GER) όσο και του χρόνου γαστρικής εκκένωσης (ΧΓΕ, GET) του χρόνου δηλαδή που απαιτείται ώστε να αδειάσει το μισό στομαχικό περιεχόμενο. Τα στοιχεία αυτά θα δώσουν χρήσιμες πληροφορίες ώστε αποτελέσματα της δοκιμής πεπτικότητας να εξηγηθούν περαιτέρω αλλά και πρώτες πληροφορίες για την κατανάλωση των πειραματικών σιτηρεσίων.
Εργασία 5.5 Εμπορικά σιτηρέσια & μεταβολισμός λίπους
Με βάση τα αποτελέσματα της πεπτικότητας της ενότητας 5.4 θα δοκιμαστούν 2-4 σιτηρέσια τα οποία θα παρασκευαστούν από την συμμετέχοντα βιομηχανία παρασκευής τροφών ΙΡΙΔΑ σε ψάρια 200 g που θα φτάσουν το εμπορεύσιμο μέγεθος σε κλωβούς (800 g - 1 kg) στις εγκαταστάσεις της ΦΟΡΚΥΣ και ΙΥ-ΕΛΚΕΘΕ. Το κάθε σιτηρέσιο θα δοκιμαστεί σε τρεις πληθυσμούς αντίγραφα. Στοιχεία από την ΕΕ3 θα χρησιμοποιηθούν για την ιχθυοφόρτιση. Κατά την διάρκεια της πειραματικής περιόδου θα αξιολογηθούν οι εξής παράμετροι:
· Aναπτυξιακές και σωματομετρικές παράμετροι, ειδικός ρυθμός αύξησης, αξιοποίηση της τροφής, της πρωτεΐνης και της ενέργειας.
· Ολική σύσταση σώματος – ήπατος, και προφίλ λιπαρών οξέων σε φιλέτο.
Η μελέτη μεταβολισμού του λίπους θα πραγματοποιηθεί με την εκτίμηση της ενεργότητας βασικών ενζύμων της λιπογέννεσης και προσδιορισμό της β-οξείδωσης σε ιστό ήπατος και μυός, αλλά και προσδιορισμό ολικών λιπιδίων σε ορό όπως τριγλυκερίδια, NEFA, φωσφολιπίδια, χοληστερόλη σε επιλεγμένα χρονικά διαστήματα μετά τη χορήγηση του σιτηρεσίου στα ψάρια.